常见技术问题

 本栏目将陆续汇集客户在使用试剂盒中的常见问题。

1.酶联免疫法定量检测试剂盒的计算问题。

ELISA定量试剂盒一般可采用酶标仪配套的电脑软件进行计算。不同的软件差别很大,设置的关键在于拟合模式(曲线类型)的选择。在电脑软件不适用时,可以选择手工绘图或EXCEL软件计算。

1.1 ELISA绘图教程(在我们的ELISA试剂盒中都提供了坐标纸,您可以用手工的方式作图)

    双对数坐标纸作图,  双对数例图

  Logit坐标纸作图, Logit例图

1.2 EXCEL软件

 双对数(log-log)回归的计算表, 

  适用于T,P,E2的(Logit-log)计算表

2.酶标仪空白孔的设置

    许多酶标仪要求设置空白孔以调零。在酶免实验中,空白孔包括空气空白(微孔中不加任何试剂,包括显色剂。最后是没有任何东西的一个微孔,代表微孔本身的透光性及滤光片变脏可能带来的背景,一般应在0.005以内);显色剂空白(加了显色剂A、B、终止液,代表显色剂带来的背景。用单波长仪器测量,一般在0.1以内,用双波长仪器测量,一般在0.005以内);酶非特异(在孔中加了酶,该酶理论上不与板上抗原抗体结合,但会在非特异性结合。该非特异与酶的浓度、纯度等有关,应当尽可能低);零标准结合(在孔中加入了零标准,在夹心法中应当是一个很低的结果,甚至会低于酶非特异);

    在一个优秀的试剂盒中,同时使用双波长酶标仪,不同的空白的数值是很低并且比较一致,此时采取任何一种空白设置方式都不会对结果有较大影响。

 

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